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      光譜儀的原理及操作方法

      發布日期:2020-12-28
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      分光光度計,又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區和波長范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其特有的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源。鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

      儀器組成

      分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。

      儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。

      原理:

      分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

      單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:

      A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

      式中 :A 為吸光度;

      I0為入射的單色光強度;

      I 為透射的單色光強度;

      T 為物質的透射率;

      k 為摩爾吸收系數;

      L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;

      c 為物質的濃度;

      物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。

      操作方法:

      1.接通電源,打開儀器開關,掀開樣品室暗箱蓋,預熱10分鐘。

      2.將靈敏度開關調至“1”檔(若零點調節器調不到“0”時,需選用較高檔。)

      3.根據所需波長轉動波長選擇鈕。

      4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內,使空白管對準光路。

      5.在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器,使讀數盤指針指向t=0處。

      6.蓋上暗箱蓋,調節“100”調節器,使空白管的t=100,指針穩定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,并記錄。

      7.比色完畢,關上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈。

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